ANÁLISE DE EXPRESSÃO DO GENE DOF EM EVENTOS DE POPULUS COM O GENE SILENCIADO POR RNAI

INTRODUÇÃO: O silenciamento da expressão de genes relacionados à biossíntese da lignina em Populus é uma estratégia promissora para otimizar processos industriais de produção de celulose. O gene DOF é um fator de transcrição associado a funções fisiológicas e possivelmente à modulação dessa via metabólica. O silenciamento desse gene, por meio de RNA de interferência (RNAi), pode contribuir para gerar plantas com perfil químico mais adequado para a indústria florestal. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do gene DOF em eventos de Populus tremula × P. alba (clone 717-1B4) transformados pela técnica de RNAi e realizar a quantificação relativa da expressão do gene-alvo por qPCR. MATERIAIS E MÉTODO: Foram realizadas etapas de micropropagação em meio MS simples, organogênese em meio WPM suplementado com reguladores de crescimento, aclimatização em substrato e análise molecular. Para a análise de expressão gênica, extraiu-se o RNA, realizou-se a síntese de cDNA e quantificação por qPCR em triplicata, calculando-se ΔCp, ΔΔCp e expressão relativa (2-ΔΔCp) em relação ao controle. RESULTADOS: A micropropagação apresentou baixo índice de contaminação e elevada taxa de multiplicação de plantas. A organogênese ocorreu em meio líquido e semissólido, com brotações. Na aclimatização, a sobrevivência foi de 50% no primeiro teste e de 100% no segundo. A análise de qPCR revelou eficácia diferencial da técnica de RNAi entre os eventos. O evento 2D apresentou expressão relativa de 1,34 vezes em relação ao controle (fold change = 1,19x), indicando ausência de silenciamento. O evento 10D demonstrou silenciamento efetivo, com redução de 56,8% na expressão do gene DOF em relação ao controle (fold change = 0,43x). Embora as diferenças não tenham alcançado significância estatística formal (ANOVA: p = 0,111), a magnitude da redução no evento 10D é biologicamente relevante e consistente com silenciamento gênico efetivo. CONSIDERAÇÕES FINAIS: A metodologia aplicada para cultivo in vitro e análise molecular foi eficiente, resultando em plantas saudáveis e dados consistentes sobre a expressão do gene DOF. O silenciamento efetivo observado no evento 10D confirma a viabilidade da técnica de RNAi para modulação da expressão gênica em Populus, enquanto a variabilidade entre eventos ilustra a natureza estocástica desta técnica. Os resultados abrem perspectivas promissoras para análises bioquímicas e metabolômicas que avaliem o impacto dessas modificações na lignina e no potencial industrial da madeira, contribuindo para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas sustentáveis na indústria florestal.

PALAVRAS-CHAVE: Populus; Expressão gênica; RNA de interferência; Cultura de tecidos; Biologia molecular.