DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE ESCHERICHIA E ENTEROBACTER EM AMOSTRAS FECAIS HUMANAS

INTRODUÇÃO: A família Enterobacteriaceae compreende diversas bactérias de importância clínica, dentre as quais destacam-se Escherichia coli e Serratia, em que estão associadas a infecções comunitárias e hospitalares, frequentemente relacionadas a processos inflamatórios e alterações de microbiota intestinal. Nesse contexto, métodos moleculares rápidos e específicos tornam-se essenciais para a detecção precoce. OBJETIVOS: Desenvolver e padronizar um método de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção e quantificação de Escherichia coli e Serratia. MATERIAIS E MÉTODO: Foram obtidas sequências genômicas de referência dos genes lacY e gyrB disponíveis no banco de dados GenBank, utilizadas para o alinhamento das sequências, construção da sequência consenso e desenho dos iniciadores específicos. Utilizou-se a PCR convencional para delimitar a temperatura ideal de hibridização dos iniciadores, posteriormente empregada na padronização da qPCR utilizando a química SYBR Green®. A especificidade do ensaio foi avaliada por meio da curva de dissociação, enquanto os valores de ciclo de quantificação (Cq) foram utilizados para a construção das curvas padrão, permitindo a determinação da eficiência de amplificação e validação do ensaio. RESULTADOS: A temperatura de hibridização ideal para ambos os gêneros bacterianos foi de 60°C. As curvas de dissociação apresentaram picos únicos para Escherichia coli e Serratia, demonstrando ausência de amplificações inespecíficas. O ensaio apresentou limite mínimo de detecção de 100 cópias por reação para Escherichia coli e 101 cópias para Serratia. As eficiências de amplificação foram de 1,09 e 0,94, respectivamente, permanecendo dentro da faixa recomendada para a validação de ensaios de qPCR. CONSIDERAÇÕES FINAIS: O protocolo desenvolvido apresentou elevada sensibilidade analítica e adequada eficiência de amplificação, permitindo a padronização de um método baseado na química SYBR Green® para detecção e quantificação de Escherichia coli e Serratia. A metodologia proposta caracteriza-se por baixo custo, elevada reprodutibilidade e potencial para aplicação em estudos microbiológicos e avaliação da microbiota intestinal.

PALAVRAS-CHAVE: qPCR; Escherichia coli; Serratia; SYBR Green; Microbiota intestinal.