OTIMIZAÇÃO DO ISOLAMENTO DE CÉLULAS SATÉLITES SUÍNAS POR COLAGENASE I EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES

INTRODUÇÃO: A padronização das condições de digestão enzimática e da superfície de cultivo é uma etapa importante para melhorar a obtenção e o desempenho de culturas derivadas de músculo suíno destinadas a pesquisas sobre carne cultivada, uma vez que variações nesses procedimentos podem influenciar a recuperação e o estabelecimento celular. OBJETIVOS: Avaliar o efeito de diferentes concentrações de colagenase tipo I, associadas à digestão subsequente com tripsina-EDTA, e da ausência ou presença de revestimento com colágeno tipo I sobre o rendimento celular, o tempo até a confluência, a viabilidade e a concentração de células viáveis ao longo das passagens. MATERIAIS E MÉTODO: Amostras de 1 g do músculo semitendinosus de um único suíno (Sus scrofa domesticus) foram distribuídas em delineamento fatorial 3 × 2, composto por três concentrações de colagenase tipo I (1, 2 e 3 mg/mL) e duas condições de revestimento das placas de cultivo (ausência ou presença de revestimento de colágeno tipo I a 0,01%), em triplicata, totalizando 18 unidades experimentais. O rendimento de células viáveis por grama de tecido foi determinado ao final da primeira passagem (P1). O tempo até a confluência, a viabilidade celular e a concentração de células viáveis por mililitro foram avaliados ao longo de três passagens (P1, P2 e P3). O rendimento foi analisado estatisticamente por meio de análise de variância fatorial, e as demais variáveis por análise de variância com medidas repetidas, seguida pelo teste de Tukey utilizando o software Jamovi versão 2.7. RESULTADOS: Não houve interação entre concentração de colagenase e revestimento para o rendimento em P1, mas foram observados efeitos da concentração e da superfície de cultivo (P < 0,01). A concentração de 2 mg/mL apresentou rendimento de 2,27 × 10⁵ células viáveis/g de tecido, superior aos valores obtidos com 1 e 3 mg/mL, de 1,04 × 10⁵ e 1,45 × 10⁵ células viáveis/g, respectivamente. A ausência de revestimento resultou em 2,01 × 10⁵ células viáveis/g, enquanto a condição revestida apresentou 1,16 × 10⁵ células viáveis/g. Houve interação entre a concentração e o revestimento (P < 0,05) no tempo até a confluência, indicando que a resposta às concentrações dependeu da presença do revestimento. O tempo até a confluência foi maior em P1 do que em P2 e P3, que não diferiram entre si (P < 0,001). A viabilidade celular permaneceu elevada, sem diferenças significativas entre os tratamentos. Houve interação entre a concentração de colagenase e passagem (P < 0,01) para a concentração de células viáveis. As combinações de 2 mg/mL em P1 e 1 mg/mL em P2 apresentaram os maiores valores, não diferiram entre si e foram superiores às demais combinações. Também houve interação entre passagem e revestimento (P < 0,05), com maior concentração no tratamento sem revestimento em P1 do que no revestido, enquanto P2 e P3 apresentaram valores intermediários independentemente da ausência ou presença de revestimento. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Nas condições avaliadas, os efeitos da concentração de colagenase e do revestimento variaram de acordo com a variável e a passagem analisada, sem que uma condição fosse superior em todas as avaliações. Entretanto, 2 mg/mL de colagenase tipo I proporcionou o maior rendimento de células viáveis ao final de P1, enquanto o revestimento com colágeno tipo I a 0,01% não apresentou benefício consistente. Esses resultados indicam 2 mg/mL como uma condição inicial promissora para estudos posteriores de padronização do protocolo.

PALAVRAS-CHAVE: Carne cultivada; Célula muscular; Digestão enzimática; Cultivo celular; Matriz extracelular.