OTIMIZAÇÃO DE REAÇÃO PARA QUANTIFICAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA DO CHD2 POR MÉTODO SYBR®GREEN EM SISTEMA DE PCR EM TEMPO REAL (QRT-PCR) PARA ESTUDO DO NEURODESENVOLVIMENTO INFANTIL

Introdução: Diversos fatores ambientais, como infecções virais e processos inflamatórios durante a gestação, podem afetar o neurodesenvolvimento fetal por meio da regulação epigenética de genes essenciais ao desenvolvimento neuronal, como o CHD2, cuja expressão alterada tem sido associada a distúrbios neurológicos como epilepsia mioclônica, transtorno do espectro autista e deficiência intelectual. Objetivos: Otimizar uma técnica baseada em SYBR® Green para análise da expressão gênica do CHD2 por qRT-PCR, visando sua aplicação em estudos clínicos sobre o neurodesenvolvimento infantil. Materiais e método: foram utilizados dados genéticos do GenBank e ferramentas de bioinformática, como Primer-BLAST, BLAST-n, DINAmelt e Mfold, para desenhar, validar e selecionar primers específicos com elevada sensibilidade e baixa formação de artefatos. A etapa laboratorial envolveu a padronização das condições ideais para amplificação do gene, com testes de diferentes concentrações de primers e diluições de cDNA, utilizando o sistema QuantStudio 3. A análise da curva-padrão determinou a diluição ideal para ensaios posteriores, e a curva de melting confirmou a especificidade dos produtos amplificados. A metodologia foi aplicada em 32 amostras clínicas de gestantes (16 controles e 16 que contraíram COVID-19), permitindo a quantificação relativa da expressão do CHD2 pelo método 2⁻ΔΔCt, com o gene GAPDH como referência. Resultados: Os resultados mostraram ausência de diferença estatística entre os grupos em relação aos valores médios de Ct; no entanto, observou-se uma heterogeneidade nos níveis de expressão de CHD2 entre as gestantes expostas, com 10 apresentando expressão reduzida e 6 com expressão aumentada. Essa variabilidade sugere que a infecção por SARS-CoV-2 pode modular a expressão gênica fetal de forma individualizada, o que reforça a relevância do CHD2 como biomarcador potencial. A técnica desenvolvida demonstrou alta reprodutibilidade, sensibilidade e especificidade, sendo adequada para estudos moleculares posteriores. Considerações finais: Conclui-se que a padronização do qRT-PCR para análise da expressão do CHD2 foi bem-sucedida e que a metodologia estabelecida pode ser empregada em futuras investigações que busquem compreender o impacto de exposições gestacionais sobre o neurodesenvolvimento infantil, sobretudo em coortes maiores e com inclusão de marcadores epigenéticos e inflamatórios.

Palavras-chave: CHD2; Neurodesenvolvimento; Expressão gênica; COVID-19.