DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE CITROBACTER E SHIGELLA EM AMOSTRAS FECAIS HUMANAS

INTRODUÇÃO: A microbiota intestinal humana é composta por diversos microrganismos que desempenham funções essenciais para a homeostase do hospedeiro, destacando-se os gêneros Bacteroides e Coprococcus, envolvidos na degradação de polissacarídeos complexos, produção de ácidos graxos de cadeia curta e modulação da resposta imunológica, podendo também estar relacionados a processos de disbiose intestinal OBJETIVOS: Detectar e quantificar bactérias dos gêneros Bacteroides e Coprococcus em amostras fecais humanas por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. MATERIAIS E MÉTODO: Sequências do gene 16S dos dois gêneros foram obtidas no banco de dados GenBank, alinhadas e utilizadas para o desenho de iniciadores específicos. A temperatura de hibridização foi definida por meio de PCR convencional com gradiente de temperatura, seguida da padronização da reação em tempo real utilizando a química SYBR Green, com avaliação da especificidade dos produtos amplificados por meio da curva de dissociação. O material genético das amostras fecais foi purificado com kit comercial e armazenado até o momento da análise. RESULTADOS: Os iniciadores desenhados para os dois gêneros apresentaram amplificação específica, evidenciada por picos únicos nas curvas de dissociação, com temperatura de melting de 80°C para Bacteroides e 84,5°C para Coprococcus, sem indícios de produtos inespecíficos ou formação de dímeros de iniciadores. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Os resultados demonstram a viabilidade da padronização de um sistema molecular específico para a detecção de Bacteroides e Coprococcus em amostras fecais humanas, representando uma ferramenta com potencial aplicação em estudos da microbiota intestinal, sendo necessária a continuidade dos ensaios de validação quantitativa, como a determinação da eficiência de amplificação e do limite de detecção, para consolidar sua aplicabilidade.

PALAVRAS-CHAVE: Microbiota intestinal; Bacteroides; Coprococcus; qPCR; Amostra fecal.