BANCO DE BACTÉRIAS E LEVEDURAS ISOLADAS DO KEFIR

INTRODUÇÃO: O kefir é uma bebida láctea fermentada, à base de leite ou água. Sua microbiota reside em seus grãos, que possui propriedades que fortalecem o sistema imunológico, melhora a digestão, equilibra a flora intestinal e possui ação antimicrobiana, anticancerígena e com baixo teor de lactose. Dadas suas diversas propriedades e seu cultivo acessível, sua busca no mercado tem recebido grande demanda- tanto para consumo, quanto para cultivo. Os kefires, se cultivados com os cuidados devidos, pode tornar-se uma cultura iniciadora, e dar origem à outros kefires razoavelmente padronizados, pois os fatores externos podem causar divergências quanto às culturas. OBJETIVOS: O objetivo do presente Plano de Trabalho é o de expandir o atual banco de isolados de bactérias e leveduras de kefir, contendo cerca de 600 de cada grupo taxonômico, para 1.500 de cada grupo. MATERIAIS E MÉTODO: Para cumprir os objetivos do projeto, foram iniciados pedidos de doações de grãos de kefires por Curitiba e região, e coletadas 5 amostras. Após seus cultivos no laboratório, foram preparados Ágar de Man, Rogosa and Sharpe e Ágar Sabouraud Dextrose, sendo esses os meios de cultura para bactérias e leveduras, respectivamente, e colocados em placas de Petri. Após o preparo do ágar, foram preparados tubos estéreis de solução salina 0,9%, utilizando 9 g de NaCl por litro de água deionizada, e logo as diluições seriadas nas soluções, obtendo as diluições 10-1 e 10-2, para utilizar 10-3, 10-4, 10-5 e 10-6. Posteriormente, as diluições foram espalhadas no Ágar MRS e ASD anteriormente preparados, espalhado com alça de Drigalski estéril, e as placas foram colocadas na estufa bactériológica a 35°C por 48h. Depois de obter colônias visíveis, uma solução de 40% (v/v) de glicerol foi preparada, e o meio em caldo foi transferido para masterblocks com 96 x 1,0 mL de cada caldo, que foram utilizadas para inocular colônias obtidas, e as placas foram colocadas em jarra de anaerobiose sob fluxo de CO2/N2, e incubadas em estufa bacteriológica por 48h à 30°C. Por fim, foram adicionados 100 µL de glicerol 40% e 100µL de cultura em cada poço de placa estéril de fundo “U”, e estocadas no freezer a -85°C. RESULTADOS: De acordo com a análise realizada após o fim da execução das etapas do experimento proposto, foram alcançadas 480 colônias isoladas de leveduras e 480 colônias isoladas de bactérias obtidas por meio do cultivo dos kefires 001, 007, 008, 009 e 010. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Baseado nos resultados obtidos, foi possível concluir que investir no cultivo do kefir e explorar sua microbiota tornou-se uma importante aplicação, e que até mesmo a interferência de fatores externos torna cada cultura única. Portanto, dedicar projetos de pesquisas acerca do kefir contribui para o ampliamento de informações atuais, e colabora para futuras aplicações alternativas, que vão além de seu consumo.

PALAVRAS-CHAVE: Bactérias; Cultivo; Kefir; Leveduras.